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时间: 2020年02月21日 06:09 | 来源: 【天下無雙】 | 编辑: 母新竹 | 阅读: 3268 次

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  辛伐他汀(Zocor)是土曲霉天然产品洛伐他汀的半组成衍生物,是一种主要的降血脂药,2015年全球销售额到达30亿美元。辛伐他汀的工业出产技能可分为三个进程:土曲霉发酵出产洛伐他汀,碱水解洛伐他汀制备monacolin J,化学办法将monacolin J转化成辛伐他汀(图1)。对于monacolin J转化成辛伐他汀,美国研讨人员前期开发了根据酰基转移酶LovD的生物催化转化办法,并取得2012年美国总统绿色化学奖。但monacolin J的制备仍然是运用传统的碱水解洛伐他汀技能,工序相对杂乱、环境污染较大。因而,开发一种绿色高效的monacolin J出产办法非常主要。包含默克公司在内的研讨团队曾企图开发可代替的生物转化办法,可是因为功率较低,都未能使用到实践出产中。这些年,中国科学院青岛生物动力与进程研讨所微生物代谢工程团队根据在丝状真菌遗传改造方面的研讨根底,与全球最大的洛伐他汀/辛伐他汀原料药出产公司浙江海正药业集团进行了深化协作,旨在对海正药业的洛伐他汀工业出产土曲霉菌株进行代谢工程改造,使之能直接发酵出产monacolin J。

<p>  为了遗传改造作业的顺利进行,该团队开发了一个高效的土曲霉遗传操作渠道,克隆表征了一系列高效土曲霉启动子,为遗传改造供给启动子元件支撑;经过错活非同源重组结尾衔接路径使基因打靶功率从5%提高到90%以上,处理了基因打靶低下的疑问;又联系尿嘧啶养分缺点双向挑选体系和改进的Cre/loxP位点特异性重组体系完成了挑选标签的循环使用,突破了挑选标签缺乏的约束。该渠道为后续的基因工程改造供给了技能渠道支撑(Huang X., et al., 2014,Huang X., et al., 2016)。

  近期,研讨团队经过体外试验判定了一个能高效水解洛伐他汀生成monacolin J的洛伐他汀水解酶PcEST,其活性远高于专利报导的洛伐他汀水解酶,是后者的232倍,而氨基酸序列一致性仅为16.8%,这说明PcEST是不受现有知识产权约束的高效洛伐他汀水解酶,为研讨效果的实践使用供给了知识产权保证。

  根据洛伐他汀水解酶PcEST,该团队对海正药业的洛伐他汀工业出产土曲霉菌株进行了遗传改造。使用强启动子PgpdAT异源表达洛伐他汀水解酶,成功地在不影响他汀化合物总产量的情况下将体内组成的洛伐他汀水解成了monacolin J,水解率到达95%,然后取得了能直接发酵出产monacolin J的土曲霉细胞工厂。该作业完成了直接使用现有的洛伐他汀发酵技能和设备,一步发酵直接出产monacolin J ,不再需求洛伐他汀水解进程,简化了辛伐他汀的出产技能,有望下降公司的出产成本和污染排放。有关效果近来发表于Metabolic Engineering上(Huang X., et al, 2017),并与海正药业联合申请了发明专利(201611079430.2)。

  上述研讨取得国家自然科学基金和海正药业集团的支撑。

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图1. 辛伐他汀出产技能及本项目研讨方案示意图?

图2. 产monacolin J土曲霉细胞工厂构建




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  查询人员随即向韩某了解熠循新能源的事务展开状况。触摸发现,韩某实践是雅百特为“忽悠”查询人员、拖延时间而安放的一颗“烟雾弹”。

(母新竹编辑《【天下無雙】》2020年02月21日 06:09 )

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